去内毒素试剂盒

使用说明书

仅供体外研究使用,不用于临床诊断!

第1版(2016年04月修订)

关联信息

细菌内毒素是革兰氏阴性细菌细胞壁的特有成份,它是一种外源性致热原,可通过激活巨噬细胞、中性粒细胞等引起炎性介质的释放,导致机体的损伤,严重者可引发脓毒性休克甚至死亡。而内毒素又是生物制品的重要污染物,所以,对于直接进入人体或者动物体内的生物制品、药品都必须?#32454;?#25511;制其内毒素含量。因此,内毒素的去除对于一些生物制品的下游纯化处理来说就显得非常重要。

原理

多粘菌素(Polymyxin)是由多粘芽胞?#21496;˙acilluspolymyxa)产生的一组多肽类抗生素。其中,多粘菌素B(PMB)能拮抗细菌内毒素,虽然他们的结合机理还存在很多争议,但是它们之间是通过静电作用,离子作用和亲水作用等多种因素共同作用的结果是大家普遍接受的事实。本试剂盒基于这一原理利?#20204;?#21644;树脂中的多粘菌素B与内毒素特异性的结合去除样品中的内毒素。亲和树脂的主要特性如下表:

规格1.5 ml 预装柱
结合能力≥2,000,000 EU/ml 树脂
配基修饰的多粘菌素 B (PMB)
pH范围pH 5-10
基质4% 交联的琼脂糖凝胶
颗粒大小90 μm
保存温度2°C-8°C
使用寿命18 个月
?#33014;?#32531;冲液磷酸盐缓冲液,pH 8.0
离子条件0.1-0.5 M NaCl
可耐受试剂20% DMSO,,20% 乙醇,20% 甘油,1 M 尿素,300 mM 咪唑, 0.05% 吐温-20, 10 mM DTT 等

产品组分

名称规格
亲和树脂1.5 ml 预装柱
再生缓冲液250 ml
?#33014;?#32531;冲液250 ml
流速控制器1 个
无热原接收管1 包 (3 支/包)
无热原枪头(1 ml)2 包(6 支/包)
说明书1 份

*亲和树脂重复使用5次不改变结合效率

还需准备的设备和试剂

1. 纯化柱支架
2. 0.1M NaOH和0.1M HCl,用于调节样品PH值
3. 氯化钠和乙醇

储存及有效期

4℃保存,有效期一年。

适用范围

蛋白,多肽,抗体,多糖?#28909;?#28082;中内毒素的去除,样品最终的内毒素水平可低于0.1 EU/ml。

操作步骤

1. 样品处理:结合内毒素的pH范围为5-10,pH范围7-8进行纯化最佳。样品在0.15-0.5M NaCl的条件可以明显增强特异性吸附并降低非特异性吸附。纯化之前可以使用无内毒素的5M氯化钠、0.1 M NaOH或0.1M HCl来调节离子强度或PH值。
2. 活化树脂:垂直装配好预装柱,去除顶部盖子,打开流速控制器,使保护液流干。加入5ml再生缓冲液,调节流速控制器,保?#33267;?#36895;在0.25ml/min(或10滴/min),待再生缓冲液流干后再加入5ml再生缓冲液,重?#24202;?#20316;2次,以确保体系中无热源(即内毒素)存在。(注意:第一次使用也必须进行?#38745;?#39588;。)
3. ?#33014;?#26641;脂:加入6ml的?#33014;?#32531;冲液,调节流速控制器,保?#33267;?#36895;在0.5ml/min,流干?#33014;?#32531;冲液,再按此操作重复2次。
4. 内毒素去除:将流速控制器关闭,使用无热源枪头加入样品,打开控制器,控制流速不高于0.25ml/min,流出液体积达到1.5ml后,使用无热源接收管收集样品。待样品流干后,再加入1.5ml-3.0ml的?#33014;?#32531;冲液淋洗,收集淋洗液。检测样品浓度及所含内毒素水平。(如果流出样品内毒素水平未能达到预期值,需要将预装柱按照步骤2重新再生,然后上样纯化。)
5. 柱保存:预装柱用完后,先用10ml?#33014;?#32531;冲液?#33014;?#26609;,待?#33014;?#28082;流干,加入1.5ml的再生缓冲液(含0.02%的叠氮化钠),2℃‐8℃保存。 

注意事项

1. 在使用本产品过程,请?#32454;?#25511;制操作环?#24120;?#38450;止外来内毒素污染纯化过的样品。
2. 试剂盒内物内毒素枪头盒收集管开封后,一次性用完。
3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

问题及解决方法

问题问题原因解决方法
去除效?#23454;?/td>样品的pH值过高或者过低,不在最适范围调节pH至7-8
样品和亲和树脂孵育时间太短降低样品的流速,或者通过低?#36335;?#32946;来解决
去除或检测系统受到外来因素污染使用无热源的实验仪器,保证体系不受污染
内毒素与目的蛋白结合太牢固1. 优化样品的pH,使它们解离 
2. 增加接触样品与亲和树脂的时间
样品损失高样品通过非特异性作用结?#26174;?#20146;和树脂上增加样品和?#33014;?#32531;冲液中NaCl的含量
目的蛋?#23376;?#20869;毒素结合牢固1. 优化样品的pH,使内毒素解离出来
2. 增加接触样品与亲和树脂的时间
样品被污染同一根柱子处理不同的样品尽量避免使用同一个预装柱处理不同样品。 如果无法避免,可以在处理一个样品之后,用10-20 ml 2M NaCl淋洗树脂,然后再处理另外一 种样品
再生缓冲液出现浑浊当再生缓冲液达到室温时将会出现浑浊使用之前在冰上冷却再生缓冲液或者在4℃条件下进?#24615;?#29983;
  • Endotoxin Removal Kit
图片展示
  • Certificate
通过ISO 9001、ISO 13485质量体系认证
留言咨询
摩纳哥与卡昂的赛事
上海时时票 11选5任二赚流水 秒速塞车怎么能算出来 二叉pk10预测 棋牌app开发需要多钱 山东时时抓获 皇马街机电玩捕鱼 浙江福彩选5走势图 天津时时开奖结果 新时时倍投技巧 内蒙古十一选五走势图表图 辽宁11选五复式玩法 六开彩現场开奖结果 幸运赛车稳赢公式 内蒙古时时跨度走势 5星老时时杀号