SABC试剂盒

使用说明书

仅供体外研究使用,不用于临床诊断!

第1版(2016年04月修订)

关联信息

SABC(Strept Avidin Biotin-peroxidase Complex Method)即链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物技术,是一种显示组织和细胞中抗原分布的免疫组化染色方法。链霉亲和素(Strept avidin)是一种从链霉菌属细菌 Streptomyces avidinii中纯化获得的四聚体蛋白。生物素为含硫的杂环单羧酸,通过其羧基与蛋白质的氨基结合,从而可标记抗体。一分子链霉亲和素可以高度特异性地与四分子生物素结合,两者之间的亲和力极为强烈。同时,由于链霉亲和素等电点低,对组织和细胞的非特异吸附很低,具有低的免疫组化背景。SABC大约可形成上百个左右的过氧化物酶和数十个左右的链霉亲和素所构成的复合物,从而有很强的放大作用。SABC法具有高敏感性,低背景和操作简便的优点。本试剂盒适用于免疫组织化学方法以显示待测抗原的分布,适用于常规石蜡包埋切片、冰冻切片,培养固定的细胞切片以及新鲜制备的血涂片、爬片等。

制品内容

名称规格成份及用途
正常豚鼠血清封闭液10mL用于组织切片的封闭
二抗0.2mL(50×)生物素标记的豚鼠抗兔IgG
SABC0.2mL(50×)链酶亲和素-过氧化物酶复合物

储存及有效期

所有试剂4℃保存,有效期1年。

自备试剂

1、粘片剂 APES或Poly-L-Lysine。
2、0.02M PBS(pH7.2-pH7.6):Na2HPO4·12H2O 7g, NaH2PO4·2H2O 0.5g,NaCl 9g,溶于1L蒸馏水中。
3、0.01M枸橼酸盐缓冲液:枸橼酸三钠(C6H5Na3O7·2H2O) 3g,枸橼酸(C6H8O7·H2O) 0.4g,溶于1L蒸馏水中。
4、DAB显色试剂盒。

石蜡切片免疫组化染色操作步骤

1、载玻片的处理:可选择APES或Poly-L-Lysine对已清洗的载玻片进行处理,室温干燥或60℃烤箱烘烤一小时;
2、石蜡切片,脱蜡至水;
3、用蒸馏水或PBS配置新鲜的3% H2O2室?#36335;?#32946;5-10?#31181;櫻?#20197;灭活内源性过氧化物酶的活性;
4、蒸馏水洗3次;
5、抗原修复:根据待检测的抗原,选择适当的方法;
  石蜡切片电炉煮沸抗原修?#24202;?#20316;方法:将切片浸入0.01M 枸橼酸盐缓冲液(pH 6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后?#31995;紓?#38388;隔5-10?#31181;?#21518;,反复1-2次。冷却后PBS(pH 7.2-7.6)洗涤1-2 次。
  石蜡切片高压抗原修?#24202;?#20316;方法:将切片浸入0.01M 枸橼酸钠缓冲液(pH 6.0),?#20820;?#20999;片,盖上锅盖,当压力锅开始慢慢喷气时(?#25216;?#28909;5-6?#31181;?#21518;),计时21-?#31181;櫻缓?#23558;压力锅端离热源,冷水冲至室温后,取下气阀,打开锅盖,取出切片,蒸馏水洗后,PBS(pH 7.2-7.6)洗涤3次。
  酶消化处理:用0.1%的胰蛋白酶作消化液,消化时间为 37℃,10-40?#31181;櫻?#20027;要用于细胞内抗原的显示。也可用0.4%的胃蛋白酶,消化时间为37℃,30-180?#31181;櫻?#20027;要用于细胞间质抗原的显示。
6、滴加正常豚鼠血清封闭液,室温20?#31181;印?#20542;去血清,勿洗;
7、滴加适当稀释的一抗(兔IgG),37℃ 1小时左?#19968;?20℃ 时2小时左右,也可4℃过夜;
8、PBS(pH 7.2-7.6)洗2?#31181;櫻?次;
9、加生物素化抗兔 IgG,20-37℃ 20?#31181;印BS(pH 7.2-7.6)洗2?#31181;印?次;
10、滴加试剂 SABC,20-37℃ 20?#31181;印BS(pH 7.2-7.6)洗5?#31181;印?次;
11、DAB 显色:使用 DAB 显色试剂盒。取显色液 A,B,按说明书步骤进?#35874;?#21248;,根据标本大小,取适当体积加至切片。室温显色,显微镜下观察显色?#20174;Γ?#26102;间一般在5-10?#31181;?#20043;间。达到合?#39318;?#33394;强度时(阳性较强,背景?#31995;停?#21363;可用蒸馏水洗涤切片,终止?#20174;Γ?br/>12、苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。

注意事项

1、一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,?#21830;?#39640;一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间。如在SABC?#20174;?#20043;后,DAB 显色之前,用加有0.01-0.02% TWEEN-20的PBS(pH 7.2-7.6)洗涤切片4次,单纯PBS 洗2次,?#32531;驞AB显色。
2、热修复抗原可选0.01M枸橼酸盐缓冲液(PH 6.0);也可以使用PBS、TBS等多种缓冲液。
3、脱蜡不彻底,容易出现非特异性背景染色,建议免疫组化切片脱蜡与常规H.E脱蜡分开。
4、如果将本试剂盒用于肝脏与肾脏等含内源性生物素含量丰富的组织切片,需要进行封闭的特殊处理。
5、不得使用过期的试剂盒,不同批号间的试剂盒也不能交叉混用。
警告:DAB为可疑致癌物,请采取必要的防范措施。

  • SABC Kit
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  • Certificate
通过ISO 9001、ISO 13485质量体系?#29616;?/span>
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